Министерство здравоохранения Российской Федерации
Государственный стандарт качества лекарственного средства
Опубликовано 19.03.2014

Корневища и корни элеутерококка колючего  - фармакопейная статья

Корневища и корни элеутерококка колючего - фармакопейная статья

Категория: Лекарственное растительное сырье

Корневища и корни элеутерококка колючего 
ФС 42-
Rhizomata et radices Eleutherococci senticosi Взамен ФС 42 — 0191 – 06

Собранные осенью, тщательно очищенные от земли, разрубленные на куски и высушенные корневища и корни дикорастущего кустарника элеутеро­кокка колючего — Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.), сем. аралиевые – Araliaceae.

Подлинность

Внешние признаки. Цельное сырье. Куски корневищ и корней, цельные или расщепленные вдоль, длиной до 8 см, толщиной до 4 см, деревянистые, твердые, прямые или изогнутые, иногда разветвленные. Кора тонкая, плотно прилегает к дре­весине.

Корневища с поверхности гладкие или слабопродольноморщинистые с пазушными почками и следами отмерших стеблей и обломанных корней.

Поверхность корней более гладкая со светлыми поперечными бугорка­ми.

Излом длинноволокнистый, светло-желтого или кремового цвета. Кор­невища с поверхности светло-коричневые, корни — более темные. Запах сла­бый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка жгучий.

Измельченное сырье. Кусочки корневищ и корней различной формы, светло-желтого или кремового цвета с коричневыми вкраплениями, прохо­дящие сквозь сито с отверстиями размером 5 мм. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка жгучий.

Порошок. Кусочки корневищ и корней различной формы, светло-желтого или кремового цвета с коричневыми вкраплениями, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слегка жгучий.

Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении поперечного среза корневища или корня видна перидерма с многослойной бурой пробкой, среди крупных кле­ток паренхимы коры, содержащих друзы оксалата кальция, расположены секреторные каналы, лубяные волокна и сердцевинные лучи. Сердцевинные лучи, как правило, шириной в 2-3 клетки, в древесине — прямые, в коре — из­вилистые. Клетки центральной части сердцевинных лучей, расположенных в коре, нередко содержат мелкие друзы оксалата кальция. Кора отделена от древесины слоем камбия. Древесина широкая, как правило, кольцесосудистая.

Секреторные каналы многочисленные, выстланы 4-5 эпителиальными клетками, просветы их заполнены бурым или оранжево-коричневым содер­жимым. В корне каналы мелкие, около 18 мкм в диаметре (диаметр каналов не меняется по всей ширине коры). В корневище каналы двух типов: более крупные каналы, около 25 мкм в диаметре, располагаются на границе фелло-дермы и лубяной части коры, мелкие (как у корня) располагаются в лубяной части коры.

Лубяные волокна с толстыми одревесневшими стенками располагают­ся, как правило, группами.

Элеутерококк колючий, корневища и корни - Pharmika.Ru

Элеутерококк колючий, корневища и корни

Рисунок — 1. Элеутерококка колючего корневища и корни. Поперечный срез корне­вища.
Многослойная пробка [1]; крупный секреторный канал на границе феллодермы и лубяной части коры [2];
мелкий секреторный канал в лубяной части коры [3]; извилистый сердцевинный луч [4];
скопление лубяных воло­кон [5]; друзы оксалата кальция [6]; камбий [7]; сосуды ксилемы [8].

Увел. 30 х.

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Фрагмент древесины

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Фрагмент древесины

Рисунок — 2. Элеутерококка колючего корневища и корни. Фрагмент древесины (продольный срез). Сердцевинный луч [1]; сосуды [2]; склеренхимные во­локна [3]. Увел. 200 х.

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Давленый препарат

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Давленый препарат

Рисунок — 3. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Склеренхимные волокна [1] с внутренними перегородками [2].

Увел. 200 x

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Давленый препарат. Пучок склеренхимных волокон

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Давленый препарат. Пучок склеренхимных волокон

Рисунок — 4. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Пучок склеренхимных волокон [I];
клетки сердцевинных лучей [2]. Увел. 200 х.

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Давленый препарат. Об¬рывки пористых сосудов с окаймленными порами

Элеутерококк колючий, корневища и корни. Давленый препарат. Об¬рывки пористых сосудов с окаймленными порами

Рисунок — 5. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат.
Об­рывки пористых сосудов с окаймленными порами [1]. Увел. 400 х.

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат Па-ренхимные клетки с друзами оксалата кальция

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат Па-ренхимные клетки с друзами оксалата кальция

Рисунок — 6. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат Па-ренхимные клетки с друзами оксалата кальция [1],
группа лубяных волокон [2]. Увел. 200 х.

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат Па-ренхимные клетки с друзами оксалата кальция

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат Па-ренхимные клетки с друзами оксалата кальция

Рисунок — 7. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат Па-ренхимные клетки с друзами оксалата кальция [1],
группа лубяных волокон [2], секреторный канал [3]. Увел. 40 х.

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Об¬рывки спиральных сосудов

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Об¬рывки спиральных сосудов

Рисунок — 8. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат.
Об­рывки спиральных сосудов [1]; капли эфирного масла [2].

Увел. 400 х.

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Об¬рывок пробки, состоящей из крупных клеток с утолщенными стенками.

Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Об¬рывок пробки, состоящей из крупных клеток с утолщенными стенками.

Рисунок — 9. Элеутерококка колючего корневища и корни. Давленый препарат. Об­рывок пробки,
состоящей из крупных клеток с утолщенными стенками. Увел. 200 х.

В клетках паренхимы коры видны многочисленные друзы оксалата кальция; крахмальные зерна содержатся только в клетках паренхимы, окру­жающих секреторные каналы, и в клетках сердцевинных лучей (отличие от других представителей семейства Аралиевые, у которых крахмальные зерна заполняют все клетки паренхимы коры).

Древесина состоит из крупных сосудов и склеренхимных волокон (либ-риформ). Клетки сердцевинных лучей, реже — либриформа, заполнены крах­мальными зернами, могут быть видны капли эфирного масла.

Корневище, в отличие от корня, имеет сердцевину, состоящую из круп­ных неодревесневших паренхимных клеток.

Измельченное сырье. При рассмотрении давленого препарата видны группы сетчатых сосудов с окаймленными порами, редко — обрывки спи­ральных сосудов; многочисленные склеренхимные волокна с внутренними перегородками; фрагменты сердцевинных лучей, в виде групп округлых кле­ток с утолщенными пористыми стенками; лубяные волокна с толстыми одре­весневшими пористыми стенками; группы паренхимных клеток, содержащих друзы оксалата кальция; фрагменты коры с секреторными каналами в виде бурых или коричневатых трубок; обрывки пробки, состоящей из крупных клеток с утолщенными стенками; часто в клетках либриформа и сердце­винных лучей видны капли эфирного масла.

Порошок. При рассмотрении давленого препарата видны обрывки сетча­тых сосудов с окаймлёнными порами, редко — обрывки спиральных сосудов; многочисленные склеренхимные волокна с внутренними перегородками; фрагменты сердцевинных лучей в виде групп округлых клеток с утолщенны­ми пористыми стенками; лубяные волокна с толстыми одревесневшими по­ристыми стенками; группы паренхимных клеток коры, содержащих друзы оксалата кальция; фрагменты коры с секреторными каналами в виде бурых или коричневых трубок; обрывки пробки, состоящей из крупных клеток с утолщёнными стенками; часто в клетках либриформа и сердцевинных лучей

видны капли эфирного масла.

Определение основных групп биологически активных веществ.

  1. УФ спектр. Ультрафиолетовый спектр раствора Б (см. «Количественное определение — 2») в области от 225 до 325 нм должен иметь максимум по­глощения при длине волны (278 ± 2) нм.
  2. Тонкослойная хроматография. Аналитическую пробу элеутерококка колючего корневищ и корней измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,0 г измельченных кор­невищ и корней помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл водно-спиртовой смеси (1 : 1) и нагревают с об­ратным холодильником на водяной бане при температуре 60 °С в течение 30 мин или обрабатывают в ультразвуковой бане без нагревания в течение 15 мин. Полученное извлечение немедленно фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).

На линию старта хроматографической пластинки размером 100 х 100 мм в виде полос длиной 10 мм, ши­риной не более 3 мм наносят по 20 мкл (0,02 мл) испытуемого раствора и раствора СО сирингина (элеутерозида В) (см. раздел «Количественное оп­ределение — 1», раствор А). Хроматографическую пластинку сушат при комнатной температуре в течение 15 мин, затем помещают в камеру (выложенную изнутри фильтро­вальной бумагой, предварительно насыщенную не менее 30 мин) со смесью растворителей хлороформ — метиловый спирт — вода (70:30:4) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителей пройдет не менее 8,5 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают в вы­тяжном шкафу при комнатной температуре до удаления следов растворите­лей.

Пластинку опрыскивают 10 % спиртовым раствором кислоты серной, нагревают в сушильном шкафу при 100-105 °С в течение 2-3 мин и просмат­ривают при дневном свете.

На хроматограмме раствора СО сирингина (элеутерозида В) должна обнаруживаться серая или серая с фиолетовым оттенком зона элеутерозида В с Rf около 0,6, принятой за Rs = 1,0. На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться серая или серая с фиолетовым оттенком зона с Rs =1,0 (элеутерозид В) и серо-коричневая зона с Rs около 0,8 (элеутерозид Е). Допускается наличие дополнительных слабо выраженных зон в верхней час­ти хроматограммы и ярко выраженных зон в нижней части хроматограммы.

Примечания.

  1. Оценка пригодности хроматографической системы.

Рассчитывают   критерий   разрешения   между зонами с Rs около 0,8 и 1,0 по формуле:

Оценка пригодности хроматографической системы

tR1 — расстояние от линии старта до середины зоны с Rs около 0,8, мм;

tR2 — расстояние от линии старта до середины зоны с Rs около 1,0, мм;

Wb 1, Wb 2 — расстояние между верхней и ниж­ней границами каждой из указанных зон (ши­рина зон), мм;

Критерий   разрешения   должен   быть   не менее 2,0.

  1. Приготовление спиртового раствора ки­слоты серной 10%.

К 90 мл спирта этилового 95 % приливают 10 мл кислоты серной концентрированной. Хранят в прохладном, защищенном от света месте.

Срок хранения — 30 дней.

  1. ВЭЖХ. На хроматограмме (ВЭЖХ) испытуемого раствора и раствора СО сирингина (элеутерозида В) (см. раздел «Количественное оп­ределение — 1») времена удерживания пика элеутерозида В не должны отли­чаться более чем на 3%.
  2. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

В коническую колбу вместимостью 25 мл помещают 0,5г измельчённого сырья, прибавляют 10 мл горячей воды, нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин и фильтруют. К 1 мл полученного извлечения прибавляют несколько капель 1 % раствора железа окисного хлорида, появляется зелёное окрашивание (полифенольные соединения).

Числовые показатели. Цельное сырье. Суммы элеутерозидов в пере­счете на элеутерозид В не менее 0,3%; элеутерозида В не менее 0,03 %; влажность не более 14 %; золы общей не более 8 %; золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте, не более 1 %; остатков стеблей, в том числе отделенных при анализе, не более 1,5 %; побуревших в изломе корневищ и корней не более 3 %; органической примеси не более 1 %; мине­ральной примеси не более 1 %.

Измельченное сырье. Суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В не менее 0,3%; элеутерозида В не менее 0,03 %; влажность не более 14 %; золы общей не более 8 %; золы, нерастворимой хлористово­дородной кислоте, не более 1 %; частиц, не проходящих сквозь сито с отвер­стиями диаметром 5 мм, не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с от­верстиями размером 0,18 мм, не более 10 %; органической примеси не более 1 %; минеральной примеси не более 1 %.

Порошок. Суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В не менее 0,3%; элеутерозида В не менее 0,03 %; влажность не более 14 %; золы общей

не более 8 %; золы, нерастворимой в хлористоводородной ки­слоте, не более 1 %; частиц, не проходящих сквозь сито с от­верстиями диаметром 2 мм, не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, не более 10 %; минеральной примеси не бо­лее 1 %.

Примечание. Показатель «Сумма элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В» предназначен   для сырья, используемого для производства водных и водно-спиртовых извлечений.

Количественное определение.

  1. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,25 мм. Около 2500,0 мг (точная навеска) сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибав­ляют 50 мл водно-спиртовой смеси (1:1) и нагревают с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения извлечение фильтруют через ватный тампон средней плотности в мерную колбу вместимостью 100 мл.Извлечение по­вторяют дважды, используя каждый раз 25 мл водноспиртовой смеси, при этом ватный тампон каждый раз переносят в колбу с сырьем. Объем извлечения в мерной колбе доводят до метки водно-спиртовой смесью, одновре­менно промывая остаток сырья в колбе. Фильтруют через нейлоновый фильтр (размер пор 0,45 мкм), отбрасывая первые 1-2 мл фильтрата (раствор А).

Раствор А хроматографируют при заданных условиях:

— объем пробы 10 мкл;

— предколонка из нержавеющей стали типа С-18, 5 мкм зернение, раз­мерами 4 х 4,6 мм;

— колонка из нержавеющей стали типа С-18 (Luna С-18(2) или анало­гичная), 5 мкм зернение, размерами 0,25 м х 4,6 мм;

— подвижная фаза:

А — фосфорная кислота : вода 0,5 : 99,5;

В — ацетонитрил.

Проводят градиентное элюирование:

Время

А, об. % В, об. %
0-5 90 10
5-27 90→80 10→20
27-30 80→50 20→50
35-40 50→90 50→10
30-35 50

50

 

Идентификацию элеутерозида В проводят по УФ-спектрам или времени удерживания.

Расчет количественного содержания проводят методом внешнего стан­дарта, для вычисления концентрации СО сирингина (элеутерозида В) про­водят трехкратное хроматографирование раствора В (объем пробы 10 мкл) и вычисляют среднее значение площади пика.

Процентное содержание элеутерозида В (X) вычисляют по формуле:

korni eleuterokokka formula

Sобр — площадь пика элеутерозида В в испытуемом растворе;

Sст — среднее значение площади пика СО сирингина (элеутерозида В);

m — масса сырья, мг;

m cm. — масса СО сирингина (элеутерозида В), мг; 10, 50, 100 — объемы аликвот или разведений в миллилитрах;

W- потеря в массе сырья при высушивании, %.

С — содержание элеутерозида В в СО сирингина (элеутерозида В), %.

Примечания

1.Приготовление растворов СО сирингина (эле­утерозида В).

Раствор А. 10,0 ± 0,1мг (точная навеска) СО сирингина (эле­утерозида В) растворяют в спирте этиловом 95 % в мерной колбе вместимостью 50 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 95 % до метки и перемешивают (раствор А).

Раствор В. 10,0 мл раствора А переносят в мерную колбу вме­стимостью 100 мл, доводят объем раствора водно-спиртовой смесью (1:1) до метки и перемешивают (раствор В).

Растворы хранят в плотно закрытых емкостях из темного стекла в прохладном, защищенном от све­та месте.

Контроль содержания СО в растворах проводят ежемесячно.

  1. Параметры   теста   «Проверка   пригодности хроматографической системы».
    Регистрируют не менее 3 хроматограмм испытуе­мого раствора СО сирингина (элеутерозида В).
    Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:

— относительные стандартные отклонения ре­зультатов отдельных измерений времён удержива­ния пиков элеутерозида В не хроматограммах ис­пытуемого раствора СО сирингина (элеутерозида В) не должны превышать 3 %.

— число теоретических тарелок для пика элеуте­розида В на хроматограмме раствора СО сирин­гина (элеутерозида В) должно быть не менее 5000.

— коэффициент ассиметрии для пика элеутерози­да В на хроматограмме раствора СО сирингина (элеутерозида В) должен быть не менее 0,8 и не бо­лее 1,5.

 

2.Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, прохо­дящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 1 г (точная навеска) измельчённого сырья помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл и проводят фракционное извлечение последовательно 2 раза спиртом этиловым 70 % и 2 раза спиртом этиловым 95 % порциями по 20 мл. Каждое извлече­ние проводят на магнитной мешалке при нагревании до температуры не вы­ше 50 °С в течение 1 ч. Извлечения фильтруют через бумажный фильтр в кругло донную колбу для отгона вместимостью 100 мл и отгоняют спирт до­суха под вакуумом на роторном испарителе. К сухому остатку в колбе при­бавляют 10 мл воды и 10 мл углерода четыреххлористого. Содержимое кол­бы тщательно перемешивают и количественно переносят в делительную во­ронку вместимостью 100 мл. Колбу дважды промывают углеродом четырех-хлористым порциями по 5 мл и смывы присоединяют к содержимому в дели­тельной воронке. Затем в колбу прибавляют 10 мл смеси хлороформ — спирт этиловый 95 % (5:1) и оставляют на 10 мин.

В делительной воронке проводят очистку водной фазы 3-кратным извлечением углеродом четыреххлористым порциями по 10 мл, отбрасывая ка­ждый раз слой углерода четыреххлористого. К очищенной водной фазе в де­лительной воронке прибавляют 20 мл смеси хлороформ — спирт этиловый 95 % (5:1) (из них 10 мл из колбы для отгона) и извлекают элеутерозиды в течение 5 мин. Нижний слой фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного в мерную колбу вместимостью 100 мл. Извлечение элеутерозидов в делительной воронке повторяют еще четыре раза той же смесью последовательно порциями 15 мл, 15 мл, 10 мл и 10 мл, собирая извлечения в ту же мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят смесью хлороформ -спирт этиловый 95 % (5:1) до метки (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 20 мл раствора А и доводят объем раствора смесью хлороформ — спирт этиловый 95 % (5:1) до метки (раствор Б).

Оптическую плотность раствора Б измеряют с помощью спектрофото­метра в максимуме поглощения при длине волны 278 нм в кювете с толщи­ной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь хлороформ — спирт этиловый 95 % (5:1).

Содержание суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В в процентах (X) вычисляют по формуле:

Содержание суммы элеутерозидов формула

D — оптическая плотность раствора Б при длине волны 278 нм;
Е 1 см1% — удельный показатель поглощения элеутерозида В, равный 302; 1,42 — коэффициент пересчета на сумму элеутероиздов;
m — масса навески сырья, г;
W — потеря в массе при высушивании сырья, %;
100, 50, 20 – разведения, мл.

Тяжелые металлы. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радиоактивность. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье».

Остаточные количества пестицидов. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. Определение проводят согласно ОФС «Микробиологическая чистота».

Упаковка, маркировка и транспортирование. Осуществляется с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».

Хранение. Хранение ЛРС осуществляется в соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».