Министерство здравоохранения Российской Федерации
Государственный стандарт качества лекарственного средства
Опубликовано 19.03.2014

Пирогенал раствор для внутримышечного введения  - фармакопейная статья

Пирогенал раствор для внутримышечного введения - фармакопейная статья

Категория: Иммунобиологические препараты

Пирогенал раствор для внутримышечного введения ФС
Вводится впервые

Пирогенал, раствор для внутримышечного введения, представляет собой липополисахарид, выделенный из клеток Salmonella typhi и растворенный в фосфатно-солевом буферном растворе.

ПРОИЗВОДСТВО

Технология получения липополисахарида (ЛПС) предусматривает культивирование производственного штамма (штамма-продуцента) в полусинтетической питательной среде, инактивацию микробных клеток формалином, поэтапное выделение и очистку липополисахарида ферментативными методами.

Производственный штамм Salmonella typhi Ty2 4446 должен обладать типичными морфологическими, культуральными, биохимическими свойствами:

Основные этапы производства препарата:

На этапе культивирования используют полусинтетическую питательную среду. Полученную биомассу проверяют на бактериологическую чистоту и типичность морфологии, проводят контроль биохимических свойств микроорганизмов, антигенные свойства проверяют в реакции агглютинации. Инактивацию микробных клеток проводят формалином, по окончании процесса инактивированную биомассу высевают на диагностическую питательную среду висмут- сульфит агар для подтверждения отсутствия роста сальмонелл.

Инактивированную культуральную жидкость подвергают ферментативному гидролизу, сепарированию, из гидролизата ферментативными методами поэтапно выделяют липополисахарид, лиофилизируют, получая субстанцию-лиофилизат очищенного липополисахарида.

ИСПЫТАНИЯ СУБСТАНЦИИ

Описание. Порошок светло-кремового цвета. Определение проводят визуально.

Белок. Не более 3,0 %. Испытания проводят колориметрически по методу Лоури в соответствии с ОФС «Определение белка». Приготовление испытуемого образца липополисахарида указывается в нормативной документации.

Нуклеиновые кислоты. Не более 5,0 %. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Определение нуклеиновых кислот по Спирину». Приготовление испытуемого образца липополисахарида указывается в нормативной документации.

Углеводы. От 40 до 60 %. Испытания проводят с антроновым реактивом в соответствии с ОФС «Определение сахаров спектрофотометрическим методом». Приготовление испытуемого образца липополисахарида указывается в нормативной документации.

Безвредность. Препарат должен быть безвредным. Испытания проводят на 5 здоровых белых мышах массой (17±1) г. 1 мл раствора липополисахарида с концентрацией 100 мкг/мл вводят внутрибрюшинно, срок наблюдения 5 дней. Приготовление испытуемого образца липополисахарида указывается в нормативной документации.

Оптическая плотность. Показания оптической плотности раствора липополисахарида при 256 нм не должно превышать 0,300; при 280 нм не должно превышать 0,200. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимых областях». Приготовление испытуемого образца липополисахарида указывается в нормативной документации.

Потеря массы при высушивании. Не более 10 %. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Определение потери массы при высушивании».

Определение минимальной пирогенной дозы (МПД) рабочей серии липополисахарида. Одна МПД должна составлять (0,0075± 0,0025) мкг ЛПС. Предварительно готовят раствор липополисахарида в концентрации 100 мкг/мл и из него, путем последовательных десятикратных разведений, готовят раствор с концентрацией 0,01 мкг/мл и из него раствор с концентрацией 0,0075 мкг/мл (к 9,0 мл испытуемого образца с концентрацией 0,01мкг/мл прибавляют 3,0 мл 0,9 % раствора натрия хлорида). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность».

За 1 час до опыта у каждого кролика дважды ректально проводят замеры температуры с интервалом не менее 30 мин. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2 °С. Животным вводят раствор препарата внутривенно из расчета 1 мл на 1 кг массы тела. Средний показатель повышения температуры должен составлять от 0,6 до 0,8 °С.

В случае, если средний показатель повышения температуры будет ниже 0,6 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,01 мкг/мл по 1мл на 1 кг массы животного, если средний показатель повышения температуры будет выше 0,8 °С, вводят раствор препарата с концентрацией 0,005 мкг/мл по 1мл на 1кг массы животного. Повторный контроль проводят на том же количестве кроликов. Если при повторном испытании после введения растворов с концентрацией 0,01мкг/мл или 0,005 мкг/мл средний показатель повышения температуры у животных составит ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С, соответственно, препарат бракуют. Минимальное количество вещества, вводимое внутривенно на килограмм массы кролика, вызывающее среднее повышение температуры тела на (0,6-0,8) °С составляет минимальную пирогенную дозу (МПД). Одна МПД должна составлять (0,0075± 0,0025) мкг ЛПС.

Субстанцию-лиофилизат очищенного липополисахарида используют для получения лекарственного препарата Пирогенал, раствор для внутримышечного введения.

ИСПЫТАНИЯ

Описание. Прозрачная бесцветная жидкость. Определение проводят визуально.

Подлинность. Препарат должен быть пирогенным. Одна минимальная пирогенная доза (МПД) должна составлять (0,0075±0,0025) мкг ЛПС (раздел «Специфическая активность»).

Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».

Цветность. Должен быть бесцветным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей».

рН. От 6,7 до 7,3. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем. Не менее номинального. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Механические включения. Видимые механические включения должны отсутствовать. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

Стерильность. Должен быть стерильным. Определяют методом прямого посева в соответствии с ОФС «Стерильность».

Аномальная токсичность. Должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность. Тест для вакцин и сывороток». Мышам массой (15±1) г вводят тест-дозу 1 мл препарата внутрибрюшинно. Период наблюдения за животными составляет 5 сут.

Специфическая активность. При введении 1 минимальной пирогенной дозы (МПД) на 1 кг массы кролика, средний показатель повышения температуры должен быть от 0,6 до 0,8 °С. Препарат, в зависимости от концентрации активного вещества, разводят стерильным 0,9 % раствором натрия хлорида до концентрации 10 мкг/мл. Затем, путем последовательных десятикратных разведений, готовят раствор с концентрацией 0,01 мкг/мл и из него раствор с концентрацией 0,0075 мкг/мл (к 9,0 мл раствора препарата с концентрацией 0,01мкг/мл прибавляют 3,0 мл раствора натрия хлорида 0,9 %). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность». За 1 час до начала опыта у каждого кролика дважды ректально проводят замеры температуры с интервалом не менее 30 мин. Различия в показаниях температуры у одного и того же животного не должны превышать 0,2 °С. Животным вводят раствор препарата внутривенно из расчета 1 мл на 1 кг массы. Средний показатель повышения температуры должен составлять от 0,6 до 0,8 °С.

В случае, если средний показатель повышения температуры будет ниже 0,6 °С, вводят 1 мл/кг раствор препарата с концентрацией 0,01 мкг/мл, если выше 0,8 °С, вводят 1 мл/кг раствор препарата с концентрацией 0,005 мкг/мл и проводят повторный контроль на том же количестве кроликов. Если при повторном испытании после введения растворов с концентрацией 0,01мкг/мл или 0,005 мкг/мл средний показатель повышения температуры у животных составит ниже 0,6 °С или выше 0,8 °С, соответственно, препарат бракуют.

Упаковка и Маркировка. В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Хранение. При температуре от 2 до 8 °С.